Połączenie szybkiego mieszania mikroprzepływowego i trójkolorowego jednocząsteczkowego FRET do badania kinetyki zmian konformacyjnych białek
Jednocząsteczkowy rezonansowy switch energii Förstera (FRET) doskonale nadaje się do badania kinetyki zmian konformacyjnych białek ze względu na wysoką czułość i zdolność do rozpoznawania poszczególnych subpopulacji w układach heterogenicznych. Jednak najpowszechniejsze podejście wykorzystujące dwa fluorofory może monitorować tylko jedną odległość na raz, a użycie trzech fluoroforów do jednoczesnego monitorowania wielu odległości zostało w dużej mierze ograniczone do fluktuacji równowagi. Tutaj pokazujemy, że trójkolorowy jednocząsteczkowy FRET można łączyć z szybkim mieszaniem mikroprzepływowym w celu zbadania zmian konformacyjnych w białku od milisekund do minut. W połączeniu z mieszaniem ręcznym wydłużyliśmy kinetykę do 1 godziny, co odpowiada łącznemu zakresowi 5 rzędów wielkości w czasie.
Zbadaliśmy konwersję monomeru w protomer tworzącej pory toksyny, cytolizyny A (ClyA), jedną z największych znanych przemian konformacyjnych białka. Specyficzne dla miejsca znakowanie ClyA trzema fluoroforami umożliwiło nam jednoczesne śledzenie kinetyki trzech odległości wewnątrzcząsteczkowych i ujawniło wcześniej niewykryty związek pośredni. Połączenie trójkolorowego jednocząsteczkowego FRET z szybkim mieszaniem mikroprzepływowym zapewnia zatem podejście do badania mechanizmów złożonych procesów biomolekularnych z wysoką rozdzielczością czasową.
Identyfikacja 7 000-9 000 białek z linii komórkowych i tkanek za pomocą mikroprzepływu pojedynczego strzału LC-MS/MS
Obecnym trendem w proteomice jest akwizycja danych w „pojedynczym ujęciu” za pomocą LC-MS/MS, ponieważ upraszcza to przepływy pracy i obiecuje lepszą przepustowość i dokładność ilościową niż schematy obejmujące rozległe frakcjonowanie próbek. Jednak podejścia jednokrotne mogą ucierpieć z powodu ograniczonego pokrycia proteomu, gdy są wykonywane przez akwizycję zależną od danych (ssDDA) w systemach nanoprzepływowych LC. W przypadku zastosowań, w których ilości próbek nie są ograniczone, badanie to pokazuje, że wysokie pokrycie proteomem można uzyskać przy użyciu systemu mikroprzepływowego LC-MS/MS obsługującego kolumnę o średnicy wewnętrznej 1 mm × 150 mm, przy natężeniu przepływu 50 μl/min i sprzężonych do spektrometru masowego Orbitrap HF-X.
Wyniki wskazują na identyfikację ~9000 białek z 50 μg strawionego białka z korzeni Arabidopsis , 7500 z mysiej grasicy i 7300 z ludzkich komórek raka piersi w ciągu three godzin analizy w jednym przebiegu. Dynamiczny zakres oznaczania ilościowego białek mierzony metodą iBAQ obejmował 5 rzędów wielkości, a analiza powtórzeń wykazała, że mediana współczynnika zmienności wynosiła poniżej 20%. Podsumowując , badanie to pokazuje, że ssDDA metodą μLC-MS/MS jest solidną metodą kompleksowej i wielkoskalowej analizy proteomu, którą w przyszłości można rozszerzyć o szybszą chromatografię i metody pozyskiwania danych niezależnych od danych.̀.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
cDNA from Plant Normal Tissue: cDNA from Plant: Corn
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
cDNA from Plant Normal Tissue: cDNA from Plant: Orange
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
cDNA from Plant Normal Tissue: cDNA from Plant: Potato
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
cDNA from Plant Normal Tissue: cDNA from Plant: Rice
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
cDNA from Plant Normal Tissue: cDNA from Plant: Wheat
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
First-Strand cDNA Synthesis SuperMix (cDNA up to 12 kb)
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
×
Immunoterapia raka z użyciem NC410, białka LAIR-2 Fc blokującego interakcję ludzkiego LAIR-kolagen
Kolageny są głównym składnikiem macierzy zewnątrzkomórkowej i są funkcjonalnymi ligandami dla hamującego receptora immunologicznego związanego z leukocytami receptora podobnego do immunoglobuliny (LAIR)-1. LAIR-2 to wydzielane białko, które może działać jako receptor wabikowy, wiążąc kolagen z wyższym powinowactwem niż LAIR-1. Proponujemy, że kolageny promują unikanie odporności poprzez interakcję z LAIR-1 eksprymowanym na komórkach odpornościowych i że LAIR-2 uwalnia supresję immunologiczną za pośrednictwem LAIR-1.
Analiza publicznych zbiorów danych dotyczących ludzi pokazuje, że kolageny, LAIR-1 i LAIR-2 mają unikalne i nakładające się związki z przeżyciem w niektórych nowotworach. Zaprojektowaliśmy dimeryczny LAIR-2 z funkcjonalnym ogonem IgG1 Fc, NC410, i wykazaliśmy, że NC410 zwiększa ekspansję ludzkich komórek T i funkcję efektorową in vivo w mysim modelu choroby ksenogenicznego przeszczep przeciwko gospodarzowi. W humanizowanych mysich modelach nowotworów NC410 zmniejsza wzrost nowotworu zależny od komórek T. Analiza immunohistochemiczna ludzkich guzów wykazała, że NC410 wiąże się z obszarami bogatymi w kolagen, w których zlokalizowane są komórki odpornościowe LAIR-1 + . Nasze odkrycia pokazują, że NC410 może być nową strategią immunoterapii nowotworów w przypadku guzów z wykluczeniem immunologicznym.
Identyfikacja immunologiczna i charakterystyka białka szkieletowego kapsydu kodowanego przez UL26.5 wirusa Herpes Simplex typu 2
Wirus opryszczki pospolitej typu 2 (HSV2), patogen powodujący zmiany opryszczkowe narządów płciowych, ingeruje w układ odpornościowy gospodarza poprzez różne znane i nieznane mechanizmy. Wirus ten był używany do badania składu antygenowego wirusa. Surowicę rekonwalescencyjną od pacjentów zakażonych HSV2 zastosowano do identyfikacji antygenów wirusowych za pomocą elektroforezy białek 2-D i immunoblottingu. Surowica rozpoznawała głównie kilka białek szkieletowych kapsydu kodowanych przez gen UL26.5, głównie ICP35 .
Doniesiono, że białko to działa przejściowo w tworzeniu wirusów, ale nie ulega ekspresji w dojrzałych cząsteczkach wirusa. Dalsze badania immunologiczne sugerowały, że to białko wywołuje u myszy odpowiedzi swoistych przeciwciał i cytotoksycznych limfocytów T (CTL), ale te odpowiedzi nie dają klinicznego efektu ochronnego w odpowiedzi na prowokację HSV2 . Dane sugerują, że immunodominacja ICP35 może być wykorzystana do zaprojektowania zintegrowanego antygenu z innymi glikoproteinami wirusowymi.
Autoimmunologiczne sygnatury starzenia się i chorób neurodegeneracyjnych związanych z wiekiem są powiązane z funkcją mózgu i białkami rybosomalnymi
Biologiczne starzenie się to złożony proces charakteryzujący się upośledzeniem funkcji komórek i tkanek, w tym układu odpornościowego. W konsekwencji starzenie się wpływa na ekspresję i rozwój autoprzeciwciał oraz autoreaktywnych limfocytów T, co w ich sumie można uznać za autoimmunom osobnika. W tym badaniu przeanalizowaliśmy, czy zestawy cech autoimmunologicznych są powiązane z określonymi fenotypami, które tworzą sygnatury autoimmunologiczne związane z wiekiem i chorobami neurodegeneracyjnymi . Dane profilu autoprzeciwciał zdrowych osobników i pacjentów z bazy danych GEO wykorzystano do zbadania autoimmunologicznych sygnatur starzenia i trzech chorób neurodegeneracyjnych, w tym choroby Parkinsona (PD), choroby Alzheimera (AD) i stwardnienia rozsianego (MS).
Nasze wyniki pokazują, że autoimmunomiczną sygnaturę starzenia charakteryzuje falisty wzrost autoprzeciwciał IgG związanych z uczeniem się i zachowaniem oraz stały wzrost autoprzeciwciał IgG związanych z rybosomami i translacją, a autoimmunomiczna sygnatura starzenia jest również związana z neurodegeneracyjną chorobą związaną z wiekiem. choroby. Co ciekawe, Analiza Różnicowej Ekspresji-Sliding Window Evaluation (DE-SWAN) zidentyfikowała trzy fale zmian autoprzeciwciał podczas starzenia się odpowiednio w wieku 30, 50 i 62 lat. Ponadto autoprzeciwciała IgG, w szczególnościte skierowane przeciwko białkom rybosomalnym mogą zostać wykorzystane jako markery prognostyczne dotyczące starzenia się i związanych z wiekiem chorób neurodegeneracyjnych. Dlatego w tym badaniu po raz pierwszy odkryto kompleksowe sygnatury autoimmunologiczne dotyczące starzenia się i związanych z wiekiem chorób neurodegeneracyjnych.
Description: A polyclonal antibody against NUDCD3. Recognizes NUDCD3 from Human. This antibody is HRP conjugated. Tested in the following application: ELISA
Description: A polyclonal antibody against NUDCD3. Recognizes NUDCD3 from Human. This antibody is FITC conjugated. Tested in the following application: ELISA
Description: A polyclonal antibody against NUDCD3. Recognizes NUDCD3 from Human. This antibody is Biotin conjugated. Tested in the following application: ELISA
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
cDNA from Plant Normal Tissue: cDNA from Plant: Corn
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
cDNA from Plant Normal Tissue: cDNA from Plant: Orange
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
cDNA from Plant Normal Tissue: cDNA from Plant: Potato
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
cDNA from Plant Normal Tissue: cDNA from Plant: Rice
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
cDNA from Plant Normal Tissue: cDNA from Plant: Wheat
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
Description: Can be used for various studies in the realm of gene expression, both normal and pathological. It is an excellent control and suitable for educational purposes.
